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CRISPR基因編輯篩選一站式服務: 物種不限，類型多樣

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CRISPR基因編輯篩選一站式服務

泓迅生物提供CRISPR一站式基因編輯服務，包括sgRNA序列設計、芯片合成、文庫構建、NGS驗證、病毒包裝、文庫細胞pool構建、高通量篩選和生信分析等。我們成功交付動植物和微生物等30+物種類型，數百個高質量CRISPR sgRNA文庫，滿足不同客戶對文庫的定制化需求，提供基因功能篩選全套解決方案。

服務優勢

數十種模式物種，定制化sgRNA設計
豐富的sgRNA表達載體，提供轉染級質粒
正確率> 80%-99%
覆蓋度>99%
均一性< 1.6-10
從sgRNA設計、文庫構建到慢病毒包裝的一站式服務

服務詳情

服務項目

服務詳情

周期
sgRNA設計

針對目標基因群進行sgRNA序列設計(條數可選)

1-2周
芯片合成

將所設計的所有sgRNA及陰性對照合成在一張芯片上

3-4周
sgRNA文庫構建

將sgRNA構建到客戶的目標載體上

2-3周
文庫質粒大抽

根據發貨量進行轉染級質粒抽提

1周
文庫質檢及NGS驗證(可選)

庫容量大于100x

文庫正確率大于80%

文庫的均一性指標小于10

2-3周
病毒包裝(可選)

慢病毒包裝，病毒滴度: 10⁸TU/ml

2-3周
文庫細胞pool構建

抗性篩選測試

慢病毒量及細胞數評估

抗性篩選

NGS檢測

4-5周
高通量篩選

正向篩選實驗、反向篩選實驗

咨詢
藥物抗性實驗、報告基因檢測

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服務流程

CRISPR基因編輯篩選服務流程

案例分享查看詳細

CRISPR sgRNA文庫構建與篩選應用實例

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

已知藥物功能篩選其耐藥靶點的方案：

1.明確該藥物功能及其致死工作濃度。

2.構建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文庫并侵染細胞，構建整合CRISPR-Cas9 gRNA的細胞混合克隆。

3.篩選：高濃度藥物短期內持續作用細胞混合克隆，成活的細胞即為產生耐藥性的細胞，其耐藥性的產生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA導致的基因改變。

4.存活的細胞通過二代測序，比對得到gRNA 信息，從而推斷出起作用的基因靶點。

常見問題

常見問題

基因編輯是對質粒還是基因組進行編輯？目前我們已經構建的成熟的編輯系統，涉及到的物種有哪些？按實驗目的，可以分為哪幾類？

基因編輯是對基因組進行編輯。目前已經成熟的物種有大腸桿菌，釀酒酵母和畢赤酵母。

按實驗目的可分為：基因敲入、基因敲除、點突變。

CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas12的優劣勢是？

簡單來說，原核基因編輯相差不大，我們目前使用的是CRISPR/Cas9基因編輯。真核Cas12a更有優勢。

與Cas9相比：

1 Cas12蛋白小，質粒或蛋白更容易進入細胞

2 從經濟方面來講，Cas12a用crRNA進行編輯，crRNA約40-44nt，其合成的價格遠低于sgRNA(約100nt)

3 識別位點PAM序列不同。Cas12a核酸酶識別5’-TTTV，切割產生交錯末端。Cas9切割產生平末端

基因編輯的方法分類是？

1.同源重組

2.核酸酶

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